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    肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法

    簡要描述:肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:特級胎牛血清進口、國產(chǎn)Fetal bovine serum(Defined FBS) 100毫升BR新生牛血清進口、國產(chǎn)New born calf serum200毫升BR馬血清進口、國產(chǎn)Horse serum200毫升BR無菌綿羊血清進口、國產(chǎn)Sterile Defidrinated Sheep Blood100毫升BR

    • 產(chǎn)品型號:
    • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
    • 更新時間:2023-12-24
    • 訪  問  量:628

    詳細介紹

    本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    檢測方法

    貨號

    肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法

    100管/96樣

    微量法

    BK-01S6925

    商品介紹:

    測定意義:

    CAD是木質(zhì)素生物合成途徑中的關鍵酶之一,是木質(zhì)素單體合成反應中的最后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

    測定原理:

    CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    試劑組成和配制:

    提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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    實驗結(jié)果判斷我有妙招:

    1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

    2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

    3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

    4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

    與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

    ① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

    ② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。

    ③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

    ④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

    ⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

    操作步驟:

    1. 樣品的準備:

    a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

    b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

    d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

    e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

    2. 試劑盒的準備工作:

    a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

    注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

    b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

    c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

    50 mg S-Methyl-ITU . sulfate(iN0S抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

    250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   常溫保存

    10uL HRP標記的抗辛抗體 Anti DIG Ab,HRP 4℃保存

    2 ug pAD-SV40T pAD-SV40T 低溫運輸,-20℃保存

    吐溫80營養(yǎng)瓊脂 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 250g

    1瓶 M-619細胞株 M-619 低溫運輸和保存

    10mL TE緩沖液,PH8.0  

    10U 二酯Ⅱ Phosphodiesterase Ⅱ  -20℃保存

    1000mL TBE Running Buffer,10X TBE Running Buffer,10X 常溫保存

    100次 蛋白折疊試劑盒 Protein Folding Kit 4℃保存

    2 ug pSUPER pSUPER 低溫運輸,-20℃保存

    肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒微量法CDCA1/Nuf2  細胞分裂周期相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

    GRM2+GRM4  促代謝型谷受體2+4抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

    phospho-Tau protein(Ser202)  磷酸化微管相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

    CP110  中心體蛋白110抗體 規(guī)格: 0.2ml

    factor V  凝因子5抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Calsequestrin  肌鈣集蛋白/收鈣素抗體 0.2ml

    CD9/MRP-1  CD9蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml

    UAP56/BAT1  ATP-依賴的RNA解旋p47抗體 規(guī)格: 0.1ml

    C17orf59  17號染色體開放閱讀框59抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Phospho-RSK2(Tyr529)  磷酸化核糖體S6激RSK2抗體 規(guī)格: 0.1ml



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