在操作AtT-20小鼠垂體瘤細(xì)胞時(shí)，需特別注意細(xì)胞的傳代與凍存環(huán)節(jié)。由于該細(xì)胞系對培養(yǎng)環(huán)境較為敏感，傳代時(shí)應(yīng)避免過度消化，建議使用0.25%-EDTA溶液輕柔處理30秒至1分鐘，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，及時(shí)加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。離心后重懸細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作需輕柔，以減少機(jī)械損傷對細(xì)胞活性的影響。
此外，凍存AtT-20細(xì)胞時(shí)，凍存液的配制比例尤為關(guān)鍵。推薦使用90%培養(yǎng)基與10%DMSO的混合液，并確保細(xì)胞密度控制在1×10^6/mL左右。凍存程序需嚴(yán)格遵循梯度降溫原則，先置于4℃冰箱平衡30分鐘，再轉(zhuǎn)移至-80℃過夜，最后放入液氮長期保存。復(fù)蘇時(shí)需快速解凍，并立即用預(yù)溫的培養(yǎng)基稀釋以降低DMSO毒性。
實(shí)驗(yàn)過程中還需警惕支原體污染問題。建議定期進(jìn)行支原體檢測，并在培養(yǎng)基中添加1%雙抗作為預(yù)防措施。若細(xì)胞狀態(tài)異常(如增殖遲緩、空泡化)，應(yīng)暫停實(shí)驗(yàn)并排查污染源。
為維持AtT-20細(xì)胞的激素分泌特性，建議每代次進(jìn)行功能驗(yàn)證(如ACTH分泌檢測)，避免長期傳代導(dǎo)致表型漂移。通過規(guī)范操作與細(xì)節(jié)把控，可顯著提升實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性與數(shù)據(jù)可靠性。
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