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    胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法

    簡要描述:胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產品:含90ml鹽緩沖液均質袋 英文名稱:Phosphate Buffered Saline 產品規格:10個/包 含225ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質袋 英文名稱:Buffered Peptone Water 產品規格:10個/包 含900ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質袋 英文名稱:Buffered Peptone Wate

    • 產品型號:
    • 廠商性質:經銷商
    • 更新時間:2023-12-29
    • 訪  問  量:601

    詳細介紹

    本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

    產品名稱

    規格

    檢測方法

    貨號

    胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法

    100管/96樣

    微量法

    BK-01S6355

    商品介紹:

    測定意義:

    ICDHcEC 1.1.1.42)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時還原NADP+生成NADPHICDHc是細胞質中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會發生顯著變化。

    測定原理:

    利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應,在340 nm下測定NADPH濃度的增加。

    所需的儀器和用品:

    紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    試劑組成和配制:

    提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
    QQ截圖20220307153537.png

    實驗結果判斷我有妙招:

    1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

    2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

    3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

    4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

    與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

    ① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

    ② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

    ③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

    ④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

    ⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

     

    操作步驟:

    1. 樣品的準備:

    a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

    b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

    d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

    e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

    2. 試劑盒的準備工作:

    a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

    注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

    b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

    c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

    氯化鈉素B肉湯基礎(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g

    100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride   4℃密封干燥保存

    1%TTC溶液  1ml/支*5

    1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存

    2 ug pBlueScript SK(-) pBlueScript SK(-) 低溫運輸,-20℃保存

    100g DNCTAB(十六烷基基)  

    2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運輸,-20℃保存

    1%聚酯80-玉米瓊脂培養基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g

    1瓶 CCC-HEK-1細胞株 CCC-HEK-1 低溫運輸和保存

    腸球菌顯色培養基  1000ml

    1mL EDTA溶液,0.2M EDTA Solution -20℃保存

    胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法ADCY9  苷酸環化9抗體 0.2mlCAMK1D  鈣調蛋白激CaMK1D抗體 規格: 0.2ml

    CTGF  結締組織生因子抗體 規格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP  辣根過氧化物標記的羊抗小鼠IgG 規格: 0.1ml

    PLAGL1/ZAC1  多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規格: 0.2mlC17orf42  17號染色體開放閱讀框42抗體 規格: 0.2ml

    UXT/Ubiquitously expressed transcript  廣泛表達轉錄蛋白UXT抗體 規格: 0.2mlBEND5  BEN結構域蛋白5抗體 規格: 0.2ml

    FGF20  成纖維細胞生因子20抗體 規格: 0.2mlChloroplast protease  葉綠體蛋白抗體(植物) 規格: 1ml

    CCDC11  卷曲螺旋結構域蛋白11抗體 規格: 0.2mlLAMR1  層粘連蛋白受體1抗體(N端) 規格: 0.1ml

    GPR39  G蛋白偶聯受體39抗體 規格: 0.1mlGFRA4  GDNF家族受體α-4抗體 規格: 0.2ml

    phospho-APBB1 (Ser347)  磷酸化鐵蛋白Fe65抗體 規格: 0.1mlphospho-IGF1R(Tyr1280)  磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規格: 0.1ml

    BFAR/RNF47  環指蛋白47抗體 規格: 0.2mlPhospho-Ack1(Tyr284)  磷酸化Ack1抗體 0.1ml

    MLF1/2/3  髓細胞性白蛋白1抗體 規格: 0.2ml

    phospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相關蛋白Rab24抗體 規格: 0.1ml

    TBX1/Brachyury  先心相關蛋白TBX1抗體 規格: 0.2ml

     


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