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    甲基檸檬酸合酶(MCS)測試盒微量法

    簡要描述:甲基檸檬酸合酶(MCS)測試盒微量法公司正在出售的產品:MFB培養基 英文名稱:MFB Medium 產品規格:250g 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉湯(TSB-YE) 英文名稱:Trypticase Soy-Yeast Extract Broth 產品規格:250g 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE) 英文名稱:Trypticase Soy-Yeast Extract Agar

    • 產品型號:
    • 廠商性質:經銷商
    • 更新時間:2023-12-27
    • 訪  問  量:789

    詳細介紹

    本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

    產品名稱

    規格

    檢測方法

    貨號

    甲基檸檬酸合酶(MCS)測試盒微量法

    100管/96樣

    微量法

    BK-01S6591

    商品介紹:

    測定意義:

    MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環的調節。

    測定原理:

    MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產生甲基檸檬酰,進一步水解產生甲基檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

    需自備的儀器和用品:

    可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

    試劑組成和配制:

    提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

    試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

    試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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    實驗結果判斷我有妙招:

    1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

    2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

    3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

    4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

    與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

    ① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

    ② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

    ③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

    ④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

    ⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

     

    操作步驟:

    1. 樣品的準備:

    a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

    b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

    d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

    e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

    2. 試劑盒的準備工作:

    a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

    注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

    b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

    c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

    250μg 淀粉樣 β- 蛋白片段 25-35 Amyloid β-Protein Fragment 25-35 -20℃保存

    抗生素檢定培養基7號 Antibiotic Agar NO.7 250g

    1mL Protein A磁珠  

    2 ug pTK-Hyg pTK-Hyg 低溫運輸,-20℃保存

    100mL 土壤腐殖酸清除劑 Soil Humic Acid Erasol 常溫

    2 ug pDsRed2-Mito pDsRed2-Mito 低溫運輸,-20℃保存

    梭菌強化瓊脂 Reinforced Clostridium Agar 250g

    5g  Sodium Cyanoborohydride  室溫陰涼干燥保存

    50T 乙型肝炎病毒cccDNA PCR測定試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

    200 mL 人中性粒細胞分離液1.085 Cell Separation Solution -20℃保存

    察氏瓊脂 Czapek Dox Agar 250g

    甲基檸檬酸合酶(MCS)測試盒微量法KLK8  激肽釋放8抗體 規格: 0.2ml

    ZFAND5  AN1型鋅指蛋白5抗體 規格: 0.2ml

    PIG3/TP53I3  p53誘導蛋白3抗體 規格: 0.2ml

    P38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  磷酸化-絲裂原活化蛋白激p38抗體(P-p38 MAPK) 規格: 0.1ml

    Phospho-Gab1 (Tyr627)  磷酸化接蛋白Gab 1抗體 規格: 0.1ml

    ABHD5  自水解結構域5蛋白抗體 0.2ml

    IL18BP  白細胞介素18結合蛋白抗體 規格: 0.1ml

    RCAN2/DSCR1L1  鈣調神經磷酸調節蛋白2抗體(唐氏綜合征候選區域蛋白1樣蛋白1) 規格: 0.1ml

    Insulin Receptor Alpha  胰島素受體α抗體 規格: 0.1ml

    CYP19/CYP19A1  細胞色素P450 19抗體 規格: 0.1ml

    Rabbit Anti-Monkey IgG/Bio  標記的兔抗猴IgG 規格: 0.1ml

    SLC40A1  細胞膜鐵轉運蛋白FP1抗體 規格: 0.1ml

     


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