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    酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

    簡(jiǎn)要描述:酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:酪蛋白胨大豆吐溫20培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Casein DigestSoy LecithinPolysorbate 20 Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 大豆-干酪素消化物瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Tryposec Soya Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 大豆-干酪素消化物培養(yǎng)基 英文名稱(chēng):Tryposec Soya Modifi

    • 產(chǎn)品型號(hào):
    • 廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
    • 更新時(shí)間:2023-12-26
    • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:634

    詳細(xì)介紹

    特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

    產(chǎn)品名稱(chēng):酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法

    產(chǎn)品規(guī)格:25管/24樣

    檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法

    產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6644

    產(chǎn)品分類(lèi):脂肪酸代謝系列
    商品介紹:

    測(cè)定意義:

    AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族,主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去酰基化反應(yīng),在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。

    測(cè)定原理:

    AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇,釋放的CoA還原DTNB生成TNBTNB412nm有吸收峰,測(cè)定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。

    自備儀器和用品:

    研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

    所需的儀器和用品:

    可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

    建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

    樣本和試劑浪費(fèi)!

    1、樣本制備

    組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

    勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

     

    細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

    先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

    【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

    4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

    QQ截圖20220307153537.png 

    實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

    選擇抗凝的注意點(diǎn):

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測(cè)定。

    1000U 核酸內(nèi)切 IV Endonuclease IV -20℃保存

    2 ug pSUMO pSUMO 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    10mL 非多糖清除劑(RNA專(zhuān)用) PS Erasol(RNA) 4℃保存

    2 ug pCMV-Tag 2A pCMV-Tag 2A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    硝酸鹽肉湯 Nitrate Broth 250g

    100g 二氫鉀 Potassium Dihydrogen Phosphate   室溫保存

    50T 沙門(mén)氏菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    1 mg  LY 294002(PI3K抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

    250ml Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE)   Glucose Veronal Buffer with EDTA(GVBE)   常溫保存

    5mL 雪旺細(xì)胞生長(zhǎng)因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

    2 ug pIRES2-DsRed-Express pIRES2-DsRed-Express 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法PCDH17  原鈣粘附蛋白17抗體 規(guī)格: 0.2ml

    TRIM11/RNF92  環(huán)指蛋白92抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Mitochondrial ribosomal protein L11  線(xiàn)粒體核糖體蛋白L11抗體 規(guī)格: 0.2ml

    FasL/CD178  兔抗FasL抗體。 規(guī)格: 0.1ml

    RASAL1  RAS蛋白樣激活劑1抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Phospho-eIF2 alpha (Ser51)  磷酸化真核啟動(dòng)因子2α抗體 規(guī)格: 0.1ml

    phospho-CAMK2G (Ter286)  磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激CAMK2G抗體 規(guī)格: 0.1ml

    PRODH  脯脫抗體 規(guī)格: 0.2ml

    HBZ/Hemoglobin ζ  紅蛋白ζ鏈抗體 規(guī)格: 0.2ml

    Phospho-Aurora B(Thr232)/Aurora C(Thr198)  磷酸化有絲分裂激B/C抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Serca2/SERCA2 ATPase  肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP2抗體 規(guī)格: 0.1ml

    GRM5/mGluR5  促代謝型谷受體5抗體 規(guī)格: 0.1ml 

    注意事項(xiàng):

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

    2、對(duì)照管只需要做一管。

    3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

    對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

    若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

     


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