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    糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

    簡要描述:Hautriwaic acid公司其它產品SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 細胞裂解液 (陽性對照) 透析袋3000200u
    臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C2.4.6-三肖基本磺醋溶液(-20℃) 2,4,6-TRInitnOBqNZqNqSULFONIC cCID 208-19-
    7. 肺部細胞系統硅膠板HF25425U 保存-20

    • 產品型號:
    • 廠商性質:經銷商
    • 更新時間:2023-12-24
    • 訪  問  量:1319

    詳細介紹

    特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

    產品名稱:糖原合成酶(GCS)測試盒微量法

    產品規格:100管/96樣

    檢測方法:微量法

    產品貨號:BK-01S6980

    產品分類:糖原系列
    商品介紹:

    測定意義:

    GCSEC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-14-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調節和血糖穩態的維持具有重要作用。

    測定原理:

    GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

    需自備的儀器和用品:

    分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

    建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

    樣本和試劑浪費!

    1、樣本制備

    組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

    勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

     

    細菌/細胞樣本:

    先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

    4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

    QQ截圖20220307153537.png 

    實驗方法學:

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

    選擇抗凝的注意點:

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

    1瓶 Daoy細胞株 Daoy 低溫運輸和保存

    TSA平板(9cm) TSA 10個/包

    200U T4 DNA連接(T4 DNA Ligase) T4 DNA Ligase -20℃保存

    125mL PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X 常溫保存

    1mL 博萊溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存

    2 ug pPICZα B pPICZα B 低溫運輸,-20℃保存

    0.4mg無菌水溶液  0.4mg/支*20

    2 ug pCAGGS pCAGGS 低溫運輸,-20℃保存

    副溶血性弧菌瓊脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g

    100mg 透明質酸 Hyaluronidase -20℃保存

    50T 口蹄疫病毒A亞型PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

    糖原合成酶(GCS)測試盒微量法Rabbit Anti-dog IgG/Cy5  Cy5標記的兔抗狗IgG 規格: 0.1mlNSMase2  中性鞘磷脂2抗體 規格: 0.2ml

    Calponin 1/COLP  鈣調節蛋白-1抗體 規格: 0.1mlMEI-1  減數分裂缺陷蛋白1抗體 規格: 0.2ml

    C16orf7/ATP-BL   16號染色體開放閱讀框7抗體 規格: 0.2ml

    Shrimp tropomyosin  南美白對蝦過敏原蛋白(蝦原肌球蛋白)抗體 規格: 0.1ml

    GHDC  GHDC蛋白抗體 規格: 0.2ml

    Phospho-Met (Tyr1003)  磷酸化肝細胞生因子受體(原基因)抗體 規格: 0.1ml

    EIF5  真核翻譯起始因子5抗體 0.2ml

    Goat Anti-Bovine IgG/Cy3  Cy3標記的羊抗牛IgG 規格: 0.1ml

    LRFN3/SALM4  神經突觸粘附樣分子4抗體 規格: 0.2ml

    LRP12  脂蛋白受體相關蛋白12抗體(抑制瘤蛋白7) 規格: 0.2ml

    phospho-MARK2(Thr595)  磷酸化絲/蘇蛋白激MARK2抗體 規格: 0.1ml

    ERα/ESR1  雌激素受體α抗體 規格: 0.1ml 

    注意事項:

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

    2、對照管只需要做一管。

    3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

    對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

    若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

     


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