貓杯狀病毒PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞)5×106cells/瓶×2

大鼠成肌細胞英文名稱：L6

橢孢青霉 Penicillium ellipsoideosporum玫瑰栗色鏈霉菌 Streptomyces rosecastaneus

NCI-H295R(人腎上腺皮質腺細胞)大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

MR-VP發酵管BR20支國產/進口

EB-3(人Burkitt淋巴瘤細胞)人腺腺細胞

爪哇霉 Rhizopus javanicus大鼠肺大動脈內皮細胞*培養基

小鼠膀胱上細胞*培養基100mL

體改良馬丁培養基/Martin Broth,Modified(Liquid)菌苗制造、生物制品和血制品真菌無菌檢驗250克國產/進口

His標簽蛋白裂解20 ug

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes吸水鏈霉菌井崗變種 Streptomyces hygroscopicus var. jinggangensis

貓杯狀病毒PCR檢測試劑盒說明書1-丁-3-甲氯吡鎓  185.7  1- butyl -3- methyl pyridinium chloride*：125652-55-3分子量： C10H16ClN

2,4-二氟三氟甲  182.09  2,4- three f two f*：64248-61-9分子量： C7H3F5

并惡唑  119.12  Benzoxazole*：273-53-0分子量： C7H5NO

2,5-雙(溴甲)-1,4-雙(辛氧)  520.386  2,5- bis (Xiu Jiaji) -1,4- bis (Xin Yangji) benzene*：147274-72-4分子量： C24H40Br2O2

5-三氟甲尿嘧  180.08  5- three fluorine uracil*：54-20-6分子量： C5H3F3N2O2

羅通定  Luo Tongding  355.427分子量：C21H25NO4*：10097-84-4

七葉皂苷鈉  Seven leaves saponins sodium  分子量：*：20977-05-3

C.I.分散紅17  C.I. disperse red 17  344.369分子量： C17H20N4O4*：3179-89-3

天青石藍  Celestine blue  363.8分子量： C17H18ClN3O4*：1562-90-9

炔丙  116.16  Phenyl group*：10147-11-2分子量： C9H8

4-(二氟溴甲)溴    4- (Xiu Jiaji - two f)*：2358-32-9分子量：

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。