內(nèi)氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

異佛手柑內(nèi)酯 CAS 482-48-4 *  規(guī)格： 20mg

1-脫氧野尻 CAS 19130-96-2 *  規(guī)格： 20mg

苯噻啶 CAS 15574-96-6 *  規(guī)格： 50mg

豆蔻酸 CAS 544-63-8 *  規(guī)格： 20mg

紅花 CAS  *  規(guī)格： 0.5g

畢靈堿 CAS 485-49-4 *  規(guī)格： 20mg

2-單異山梨酯 CAS 16051-77-7 *  規(guī)格： 50mg

耐斯糖 CAS  *  規(guī)格： 20mg

醋酸奧曲肽 CAS  *  規(guī)格： 20mg/支

環(huán)己 CAS  *  規(guī)格： 0.2ml

通關(guān)藤苷H CAS  *  規(guī)格： 20mg

棘膏 CAS  *  規(guī)格： 0.5g

頭孢克肟 CAS 79350-37-1 *  規(guī)格： 100mg

頭孢呋辛酯 CAS 64544-07-6 *  規(guī)格： 200mg

胸腺五肽 CAS  *  規(guī)格： 50mg/支

內(nèi)氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書小鼠結(jié)締組織纖維細胞  LTK

月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG培養(yǎng)基/月桂基硫酸鹽胰蛋白胨4-傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基/LST-MUG Medium大腸桿菌O157檢測250克國產(chǎn)/進口

氣單胞菌培養(yǎng)基添加劑/Ampicillin Selective Supplement加入100ml氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)10支國產(chǎn)/進口

肝素抗凝管5毫升國產(chǎn)/進口

M-TGE湯/M-TGE Broth奶制品中濾膜細菌計數(shù)250克國產(chǎn)/進口

人腺成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠腎小管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

透明質(zhì)酸酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

改良月桂基硫酸鹽胰蛋白月示湯(MLST) 規(guī)格： 250g 用途： 用于奶粉中阪崎腸桿菌的檢驗的增菌和分子生物學檢驗方法（PCR）選擇性增菌

碳酸酐酶Ⅱ(CA2)天然蛋白   Native Carbonic Anhydrase II (CA2)

層粘連蛋白β1(LAMβ1)重組蛋白  Recombinant Laminin Beta 1 (LAMb1)

基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)重組蛋白  Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)

神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)重組蛋白  Recombinant Neurotrophin 3 (NT3)

增殖關(guān)聯(lián)蛋白2G4(PA2G4)重組蛋白  Recombinant Proliferation Associated Protein 2G4 (PA2G4)

HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞)5×106cells/瓶×2

SW1116(人結(jié)腸腺細胞)5×106cells/瓶×2

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。