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    當前位置:首頁  >  技術文章  >  ?黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

    ?黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

    更新時間:2022-03-17      點擊次數:671

    黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟:


    方法


    1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     


    10×PCR buffer                   


    5 μl     dNTP mix (2mM)             


    4 μl     引物1(10pM)                 


    2 μl     引物2(10pM)                 


    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               


    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  


    1 μl      加ddH2O至 50 μl  


    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。


    2調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。


    3結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。


    4PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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