kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)實驗報告

kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

小鼠胰島素(mouse Insulin)

小鼠抑制素A(mouse Inhibin A)

小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)

小鼠IP-10(mouse IP-10)

小鼠8異前列腺素(mouse 8-iso-PG)

小鼠白三烯B4(mouse LTB4)

小鼠瘦素(mouse Leptin)

小鼠瘦素受體(mouse Leptin receptor)

小鼠促黃體生成激素(mouse LH)

小鼠巨嗜細胞趨化蛋白-1(mouse MCP-1)

小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(mouse MDC)

小鼠髓過氧化物酶(mouse MPO)

小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)

小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)

小鼠巨噬細胞游走抑制因子(mouse MIF)

小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-1(mouse MIP-1)

小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-2(mouse MIP-2)

小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-3a(mouse MIP-3a)

小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-3β(mouse MIP-3β)

小鼠巨嗜細胞炎性蛋白-1a(mouse MIP-1a/CCL3)

小鼠基質金屬蛋白酶-1(mouse MMP-1)

小鼠基質金屬蛋白酶-2(mouse MMP-2)

小鼠基質金屬蛋白酶-3(mouse MMP-3)

小鼠基質金屬蛋白酶-9(mouse MMP-9)