須毛癬菌LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

須毛癬菌LAMP試劑盒實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

1．CTAB 溶液在低于15℃時(shí)會(huì)析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。

2．在最適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過(guò)，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質(zhì)，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。

3．飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性，但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用ben酚和氯仿的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時(shí)可加入適量的異戊醇（ben酚—氯仿—異戊醇=25:24:1），異戊醇的作用是消泡，并使蛋白質(zhì)層緊密，使水相和有機(jī)相分層較好。 細(xì)菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA 十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

操作流程：

1. 根據(jù)要保存的各樣本的體積，計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍（如100mg組織約用1ml RNAwait）；離心收集2×106細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。

2. 將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中；

3. 快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀，立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過(guò)厚則RNAwait不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護(hù)。較小的組織（如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官）取下后可以直接浸入RNAwait。

4. 保存時(shí)先將樣本浸入RNAwait后置4℃冰箱過(guò)夜（4℃過(guò)夜是必需的，這樣可使RNAwait*滲入到組織中），然后轉(zhuǎn)移到-20℃冰箱（RNAwait在-20℃時(shí)仍為液態(tài)，有結(jié)晶析出，是正常情況）；或者在4℃冰箱過(guò)夜后，從RNAwait中取出組織塊，轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的標(biāo)本，反復(fù)凍融至室溫20次不影響RNA的質(zhì)量。

重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL8 / MCP-2 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白

重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL2 / GRO2 / MIP-2 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)

重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL5 / RANTES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 標(biāo)簽)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標(biāo)簽)

重組人 CXCL4 / PF4 蛋白

重組人 CXCL12 / SDF1b 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)